Johdanto
Tutkimuksen tarkoitus on osoittaa mahdollinen malariainfektio. Ensimmäisestä näytteestä tehdään ilman erillistä pyyntöä malarian nukleiinihappo-osoitus ja keskussairaaloissa pikatesti. Lisäksi näytteet mikroskopoidaan Tampereen keskuslaboratoriossa tuloksen varmistamiseksi ja parasitemia-asteen määrittämiseksi.
Malarian aiheuttaa Plasmodium-loisalkueläin, joka leviää Anopheles-sukuun kuuluvien naarashyttysten välityksellä. Malariaa ihmisissä aiheuttaa viisi eri Plasmodium-lajia: P. falciparum, P. vivax, P. malariae, P. ovale ja P. knowlesi. Vaarallisimman malarian aiheuttaa yleisin malarialoinen P. falciparum, joka ilman hoitoa johtaa kuolemaan noin 20 %:ssa tapauksista. Lähes kaikki Afrikassa saadut malariatartunnat ovat falciparum-malariaa. Hyttysen pistäessä alkueläin kulkeutuu ensin maksaan ja sieltä edelleen veren punasoluihin. Alkueläin lisääntyy punasolujen sisällä aiheuttaen solujen hajoamista ja kliinisiä taudin oireita. P. vivax ja P. ovale saattavat piillä maksasoluissa kuukausia ja jopa vuosia, minkä vuoksi malaria saattaa puhjeta vasta pitkän ajan kuluttua matkalta paluusta. P. falciparum ja P. malariae sen sijaan eivät jää maksaan piileviksi.
Indikaatiot
Malariaepäily. Kuumeilu endeemiseltä alueelta tulleella.
Tutkimuksen tilaaminen
Sähköinen pyyntö ja vastataan ohjelman esittämiin kysymyksiin. TAYS:n ulkopuolelta tulevien näytteiden mukana tulee olla lähete, josta käy ilmi, missä tartunta on mahdollisesti saatu, oireet sekä lääkitys. Pyyntöihin tulee kirjata myös pyytävän yksikön puhelinnumero.
Näyteastia
Sivelyvalmiste ja paksupisara: kapillaariverestä tehtyjä Sysmex SP-slides laseja (4+4 kpl)
Pikatesti/NhO-testi: 2 kpl (1 pikatestiä ja 1 NhO-testiä varten) EDTA-putki (K2) 5/3 ml tai EDTA-Microtainerputki 0,5 ml
Näyte
Kapillaariverestä tehdään välittömästi (4 kpl) sivelyvalmisteita ja (4 kpl) paksupisaravalmisteita. Objektilaseina käytetään Sysmex SP-Slides -laseja, joissa on katkaistut kulmat
Paksupisaravalmiste: iso pisara verta otetaan objektilasille (Sysmex SP-Slides) ja sitä sekoitetaan lasisauvalla tai objektilasin reunalla neliön muotoiselle alueelle (n. 2 x 2 cm) fibriiniverkon hajoittamiseksi noin 30 sekuntia. Veren paksuus on sopiva, kun siitä näkyy sanomalehden teksti juuri ja juuri läpi. Näytteet on kuivatettava hyvin. Paksupisaravalmisteita ei saa kiinnittää!
KESKUSSAIRAALAT: Näytteestä tehdään keskussairaalalaboratoriossa pikatesti päivystyksenä. EDTA-putki ja lasit lähetetään Tampereen keskuslaboratorioon, jossa tehdään edelleen malaria-nukeliinihapon osoitustutkimus ja mikroskopointi (katso yst. myös kohta ”Tulos valmiina”). Näytteet lähetetään seuraavassa mahdollisessa kuljetuksessa. Poikkeustilanteissa käytetään tarvittaessa taksia (esim. Vaasa viikonloppuisin).
Näytteen säilytys, kuljetus ja esikäsittely
Hyvin kuivatetut sivelyvalmisteet ja paksupisaravalmisteet säilyvät viikkoja, lähetys huoneenlämmössä.
Pikatesti/NhO-näyte , EDTA-veri, säilytys jääkaappilämpötilassa 3 vrk, lähetys huoneenlämmössä.
Menetelmä
MGG-värjäys sivelyvalmisteesta.
Pikatesti: BinaxNow Malaria
Malaria-NhO: Alethia Malaria
Tekotiheys
Pikatesti ja NhO-osoitus päivystyksenä. Mikroskopointi seuraavana päivänä (näytteitä mikroskopoidaan myös la-su).
Tulos valmiina
Mikäli ensimmäinen näyte on malarian suhteen negatiivinen, mutta kliininen epäilys on vahva, suositellaan näyte toistamaan 6-12 välein 3-4 kertaa, mieluiten kuumepiikin aikana. Mikäli kolme näytettä on negatiivisia sekä pikatestillä/NhO-osoitukseella että mikroskopoiden, on malaria epätodennäköinen.
TAYS: Näytteestä tehdään päivystyksenä NhO-osoitus, lasit mikroskopoidaan päivisin. Mikäli NhO-testi on positiivinen, tehdään myös pikatesti. Tällä saadaan tunnistettua mahdollinen P. falciparum-infektio. Kaikki positiiviset näytteet tai epäselvät tapaukset lähetetään edelleen referenssilaboratorioon (HUS) lajitunnistukseen. Negatiivisia näytteitä ei lähetetä.
KESKUSSAIRAALAT: Näytteestä tehdään paikallisesti päivystyksenä pikatesti, joka on valmis noin 2 tunnin sisällä näytteenotosta. EDTA-verinäyte ja lasit lähetetään Tampereen keskuslaboratorioon, jossa tehdään varmistuksena NhO-osoitus ja lasit mikroskopoidaan. NhO-osoitus valmistuu Tampereen laboratoriossa saman päivän aikana (tehdään päivystystutkimuksena), lasit mikroskopoidaan päivisin. Mikäli näyte on positiivinen tai tulos on epäselvä, laboratorio lähettää näytteen edelleen referenssilaboratorioon lajitunnistukseen. Negatiivisia näytteitä ei lähetetä.
Mikäli näyte on piketestillä/NhO-osoituksella positiivinen, jatkonäytteistä ei testejä enää uusita, vastataan ”Tutkimusta ei tehdä”. Mikäli ensimmäinen näyte on negatiivinen, mahdollisista seurantanäytteistä testit uusitaan. Pikatesti/NhO-testi ei sovellu infektion seurantaan. Se pysyy positiivisena pitkään sairastetun malarian jälkeen.
Tehdyt lasit mikroskopoidaan viimeistään seuraavana päivänä riippuen siitä milloin näyte saapuu Tampereen keskuslaboratorioon. Laseja mikroskopoidaan myös viikonloppuisin.
Tulkinta
Sivelyvalmiste: Normaalisti parasiitteja ei valmisteessa havaita. Parasiitit näkyvät rengasrakenteina punasolujen sisällä. Infektoituneiden punasolujen %-osuudesta esitetään arvio. Malariakantojen tyypitys varmistetaan HUS:n Parasitologian yksikössä.
Pikatesti:Positiivisia vastauksia on kolme erilaista:
1) P. falciparum-antigeeni positiivinen.
2) Pan-malaria-antigeeni positiivinen. Tulos viittaa P. ovale- tai P. malariae- tai P. vivax- infektioon.
3) Sekä P. f.- että pan-malaria antigeeni positiivinen. Tulos viittaa ensisijaisesti P. falciparum-infektioon. Sekainfektio on mahdollinen.
NhO-osoitus: Vastataan positiivinen tai negatiivinen. Testi tunnistaa kaikki viisi ihmiselle infektioita aiheuttavaa plasmodium-lajia mutta ei erottele niitä tuloksessa.
Soitettavat hälyttävät tulokset
Kaikki positiiviset tulokset soitetaan tilaajalle.
Lisätiedot
Jos epäillään jotakin muuta veren parasiittia (esim. mikrofilariat) on mahdollista tehdä erillinen pyyntö yleislähetteellä. Näytemuoto näissä on sama kuin plasmodium-tutkimuksessa (Huom! 10 ml Li-hepariiniputki Edta:n sijaan + sively/paksupisaravalmiste).